Ussing chamber（尤斯灌流室）非常適合用于研究多肽在腸道組織上的透過率（多肽腸吸收）。它是目前評估多肽、藥物等物質(zhì)腸道滲透特性的標(biāo)準(zhǔn)體外 / 離體模型之一，尤其在口服多肽藥物研發(fā)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

一、工作原理（為何適合多肽）

Ussing chamber 將離體腸道黏膜（如大鼠、人空腸 / 結(jié)腸）固定在兩個充液腔室之間：

·       頂側(cè)（Apical, 黏膜側(cè)）：模擬腸腔，加入含多肽的供試液。

·       基底側(cè)（Basolateral, 漿膜側(cè)）：模擬血液 / 組織液，作為接收池。

通過控制溫度、pH、供氧（95% O?+5% CO?），維持組織生理活性。

實(shí)驗(yàn)核心：

·       定時從基底側(cè)取樣，檢測多肽濃度

·       計算表觀滲透系數(shù) (Papp, cm/s)：Papp=A?C0dQ/dt

§       dQ/dt：滲透速率

§       A：組織有效面積

§       C0：初始供試濃度

二、用于多肽研究的核心優(yōu)勢

1、保留完整生理屏障

§       含完整上皮細(xì)胞層、緊密連接、刷狀緣肽酶、轉(zhuǎn)運(yùn)體（如PepT1）

§       比 Caco-2 細(xì)胞模型更貼近體內(nèi)真實(shí)環(huán)境，與體內(nèi)生物利用度相關(guān)性更高（R2可達(dá) 0.81）

2、直接量化透過率

§       精確測定黏膜→漿膜的凈通量，直接給出透過百分比

§       例：乳清寡肽在仔豬空腸的透過率僅 0.6%~3.35%

§       例：修飾催產(chǎn)肽 P4 在結(jié)腸 2 小時透過率達(dá) 6.85%

3、機(jī)制解析能力強(qiáng)

§       電生理監(jiān)測（TEER、短路電流）：實(shí)時判斷組織完整性

§       可聯(lián)用酶抑制劑 / 轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑：區(qū)分被動擴(kuò)散、主動轉(zhuǎn)運(yùn)、酶降解

§       研究結(jié)構(gòu) - 透過性關(guān)系：如環(huán)化、D - 氨基酸修飾對穩(wěn)定性與滲透的影響

三、典型實(shí)驗(yàn)流程（多肽）

1.       組織制備：取動物 / 人腸道（空腸常用），去除漿膜 / 肌肉層（可選），洗凈固定

2.       平衡：37℃氧飽和緩沖液孵育 20–30 min，TEER 達(dá)標(biāo)（>30 Ω?cm2）

3.       給藥：頂側(cè)加多肽（常加肽酶抑制劑防降解）

4.       取樣：基底側(cè)定時取樣（30–120 min）

5.       檢測：HPLC、LC-MS/MS 定量，計算Papp 與累積透過率

四、局限性（需注意）

·       離體組織壽命有限（通常 < 4 小時）

·       種屬差異：動物組織與人腸道存在酶 / 轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)差異

·       多肽易降解：需嚴(yán)格控制溫度、pH、酶抑制

·       無法模擬全身循環(huán)、肝臟代謝

五、總結(jié)

Ussing chamber 是研究多肽腸道透過率的金標(biāo)準(zhǔn)離體模型，能精準(zhǔn)量化透過率、解析轉(zhuǎn)運(yùn) / 降解機(jī)制，數(shù)據(jù)與體內(nèi)高度相關(guān)。常用于：

·       口服多肽早期滲透性篩選

·       結(jié)構(gòu)優(yōu)化（提高穩(wěn)定性 / 透過率）

·       促滲劑（如 SNAC）效果評價